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Accucore液相色谱柱使用维护与保养
点击次数:913 发布时间:2016-10-20
  
  
  Accucore液相色谱柱使用前应仔细阅读说明书,注意色谱柱的使用温度、pH值范围、所用缓冲盐的种类等。
  
  1、新色谱柱在使用前,先用纯甲醇在254nm波长下处理,直至基线冲平为止,然后用甲醇:水=10:90(V:V)冲柱子,直到基线冲平为止。
  
  2、一般反相色谱柱使用方法:先以甲醇:水=10:90(V:V)冲洗柱子45分钟,再换上流动相平衡45分钟,根据基线情况进样(基线漂移不符合要求时应延长平衡时间),分析样品完毕,流动相继续20分钟(或20分钟又上),使用缓冲盐(或含盐)作流动相,应用不含缓冲盐(作同量的水代替缓冲盐)的流动相冲洗色谱柱,使色谱柱中的盐完全洗掉。再换上甲醇:水=10:90(V:V)冲洗柱子45~60分钟,然后再用100%甲醇冲40分钟,再放置保存。
  
  注意:不能用纯有机溶剂直接冲洗色谱柱,防止盐析出,堵塞色谱柱或仪器管路,而使色谱柱报废。
  
  3、一般正相色谱柱使用方法:zui常用的流动相是水和乙腈混合物。先用乙腈:水=85:15(V:V)冲洗柱子45分钟,再换上流动相平衡45分钟,根据基线情况进样(基线漂移严重应延长平衡时间),分析样品完毕,流动相继续20分钟(或20分钟以上),再换上乙腈:水=85:15(V:V)冲洗柱子45~60分钟,放置保存。
  
  4、特殊色谱柱(手性柱或异构体柱子)使用时,除仔细阅读说明书外,还需向所购买单位详细咨询使用方法及注意事项,确认无误后,方可使用。
  
  5、在替换溶剂时,应确保系统和色谱柱中的溶剂与新溶剂互溶。如果两种溶剂互溶性和物理性质未知,可以把两种溶剂倒在烧杯中观察,以避免直接进入HPLC系统可能出现不互溶的问题。
  
  6、对于反相柱,长期保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。正相柱可以储存于严格脱水后的纯正已烷中,储存的温度按照说明书要求储存。
  
  7、Accucore液相色谱柱在装卸、更换时,动作要轻,接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动,以免柱床产生空隙。
  
  8、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会影响柱内填料状态,因此在调节流速时应该缓慢进行。
  
  9、应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱柱中,不应直接从有机溶剂改变为全部是水,反之亦然。
  
  10、如使用柱温控制装置时,应注意在通入流动相后才能升温。温度波动会引起色谱峰漂移并产生多种影响。使用色谱柱时,保持柱温恒定非常重要。填料粒度不同也是选择和考虑色谱柱使用温度的因素之一。粒径小于5μm的填料在温度升高时柱床更容易塌陷,使柱效下降。如果运用得当,柱温也是改善色谱分离的一个有效办法,降温可以增加保留时间、提高选择性和分离度等,升温则相反。
  
  11、一般色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲。
  
  12、Accucore液相色谱柱使用过程中,如果压力升高,一种可能是烧结滤片被堵塞,这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进入柱内,使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形,则可能柱头出现塌陷,死体积增大。
  
  
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