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液相色谱柱的正相柱和反相柱使用方法介绍
点击次数:2285 发布时间:2016-11-12
  
  
  液相色谱柱是运用于色谱仪系统中起着分离作用的仪器,是色谱仪分析系统的核心部件,色谱柱柱效的高低影响着检测速率的快慢以及检测结果的准确性。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快。色谱柱的性质(粒度、粒径分布等)、填充料、柱长、固定相和流动相的种类等都是影响色谱柱柱效的因素。因此,为了提高色谱柱的柱效,保证液相色谱仪分析检测的灵敏性,了解液相色谱柱的结构性能尤为重要。
  
  液相色谱柱通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等。
  
  正相色谱柱的使用方法
  
  1.新柱子可直接用流动相。推荐先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积,再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲10倍柱体积,zui后换成流动相;
  
  2.正相使用时,不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于还原糖的分析;流动相要彻底脱气,并不得含有羰基化合物和过氧化物(质量不好的乙醚、四氢呋喃含有少量);
  
  3.任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶。
  
  反相色谱柱的使用方法
  
  1.先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积,再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、异丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)冲柱子;
  
  2.以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠(LUNA)水溶液冲柱子(注意pH值切不可超过11.0),立即用水(0.5ml/min的流速,30倍柱体积)冲洗,再换成流动相;
  
  3.配制流动相时,应各组分分别量取,比例较小的组分要精密量取,需调pH值时要精密到0.1;
  
  4.反相条件下使用时,要特别注意控制pH值范围,pH值越低越有发生水解的危险,流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。zui理想的pH范围在pH3.0-7.0;
  
  5.如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类,建议在用分析流动相之前,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
  
  
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