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Acclaim液相色谱柱如何正确使用缓冲盐
点击次数:67 发布时间:2021-09-26
  Acclaim液相色谱柱的柱长及内径的选择原则是什么?长度的选择:柱越长,总柱效越高(n值越大),柱越长,分析时间也越长。250—300mm是普遍的柱长,实验室一半以上的工作都是采用此规格柱子,一般用来分离l0到50个组份的中等至复杂混合物;500—600mm,要求较高分辨率的应用,—般用来分离大于50个组份或包含有难分离物质的复杂样品程序升温分析。
 
  内径:柱效率与柱半径平方成反比,内径越小柱效越高,但内径越大,柱容量也增加,允许进样量就越多。当进样量超过柱容量时,则因柱内每块理论板内不能建立真正的平衡,将会导致色谱峰畸变,柱分辨率降低,重现性不好。因此对于复杂样品需要准确分离,必须使用小内径柱子。另一方面若样品中存在具有很不相同浓度组份化合物,为了增加样品容量就必须使用内径大的柱子,目前实验室使用常见的柱子内径一般是4.6mm。
 
  分析大分子量化合物选择大孔径色谱柱;对于高pH值或者碱性化合物需要选择高封端或者特殊封端的色谱柱,以改善峰形,延长色谱柱使用寿命等。Acclaim液相色谱柱内径有2.1、3.0、4.6、10mm可供选择,不锈钢材质不易因为磕碰损坏柱管。
 
  正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出,因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话:使用前要过滤,使用后要冲洗。具体方法如下:
 
  1、等度条件:使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以1、0ml/min流速冲洗60min;使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0、2ml/min流速冲洗色谱柱过夜。
 
  2、梯度条件:用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1、0ml/min流速冲洗60min,再用该过渡流动相以1、0ml/min冲洗色谱柱120min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓,以避免梯度过程中缓冲盐析出。
 
  3、缓冲盐析出的补救方法:
 
  a、用甲醇/20/80以1、0ml/min流速35摄氏度条件下反向冲洗色谱柱120min
 
  b、用甲醇/水=20/80以0、2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。
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